Menjadi Dengan Komune Schizophyllum: Buat Kultur Steril Dari Jamur yang Ditemukan: 3 Langkah (dengan Gambar)

2024 Pengarang: John Day | [email protected]. Terakhir diubah: 2024-01-30 09:58

Instruksi ini difokuskan untuk menjelaskan cara membuat kultur steril jamur Schizophyllum Commune (nama umum jamur Split Gill) pada cawan petri menggunakan jamur yang ditemukan. Schizophyllum Commune telah ditemukan memiliki lebih dari 28.000 jenis kelamin, dapat ditemukan di semua benua kecuali Antartika, dan memiliki kemampuan (seperti "jamur busuk putih dan coklat" lainnya) untuk mendegradasi polusi yang mengganggu endokrin (plastik, petrokimia industri yang meniru hormon seperti pupuk Atrazine, plasticizer Bisphenol-A, atau hormon sintetis Diethylstilbestrol).

Saya akan membahas teknik identifikasi jamur liar, cara membuat cawan petri agar nutrisi, dan cara menggunakan jamur yang Anda temukan untuk menumbuhkan kultur terisolasi steril di cawan petri Anda. Instruksi lain dalam seri ini membahas teknik seperti identifikasi genetik jamur, uji enzimatik sederhana untuk menguji kemampuan jamur untuk memecah plastik dan polusi yang meniru hormon, dan cara membuat keju dengan S. Commune.

Proyek ini keluar dari karya kolaboratif Mary Maggic, Paula Pin, dan saya sendiri selama residensi di HANGAR di Barcelona Spanyol musim gugur September 2018. Untuk info lebih lanjut tentang proyek, baca terus ~~ atau lewati semua Bla Bla dan langsung ke Langkah 1 untuk tutorialnya:)

Gambar berasal dari Schizophyllum Commune Fanzine ~ file dapat diunduh gratis di sini

Selama residensi, tiga tujuan utama kami adalah:

1 ~ Meneliti dan mencerna literatur ilmiah tentang Schizophyllum Commune dan berbagai interaksinya dengan hormon dan endokrin yang mengganggu polutan petrokimia. S. Commune adalah salah satu dari banyak jamur "busuk putih dan coklat" dengan kemampuan untuk memecah polusi yang mengganggu hormonal dan endokrin. Jamur ini memakan pohon dengan mengeluarkan enzim "lignoselulosa" dari jaringan tubuh mereka atau "miselia" dan enzim tersebut mampu memecah selulosa dan lignin yang terbuat dari pohon. Karena kesamaan struktural antara selulosa, lignin, dan EDS' / Hormon seperti Atrazin, BPA, Estradiol, Dietilstilbestrol, dan Nonilfenol, enzim "lignoselulosa" yang disekresikan oleh jamur juga dapat memecah berbagai macam racun. Selain itu, S. Commune memproduksi polisakarida imunostimulan yang bermanfaat sebagai pencegahan dan pengobatan kanker (Disetujui di Jepang untuk pengobatan kanker serviks), dapat meningkatkan sifat fitoestrogenik tanaman tertentu melalui fermentasi, dapat digunakan sebagai pengganti rennet dan lactobacilius dalam proses pembuatan keju, dan menghasilkan enzim pelarut bekuan trombin (berguna dalam mengobati trombosis). Anehnya, "beta-glukan" yang sama ini yang dapat diekstraksi dengan air mendidih sebagai pengobatan kanker dan imunostimulan, juga digunakan oleh industri perminyakan untuk meningkatkan hasil minyak, mengikat S. Commune dalam lingkaran umpan balik bizaar dengan produksi gangguan endokrin petrokimia itu mampu menurunkan dan memulihkan.

2 ~ Kembangkan protokol DIY dan DIWO (lakukan dengan orang lain) yang menyederhanakan resep ini untuk bekerja dengan EDC dan jamur untuk menerjemahkan pengetahuan ilmiah yang terkodifikasi ke dalam bahasa yang lebih mudah diakses. Gunakan resep ini untuk pendidikan, untuk pertanyaan, untuk perlawanan terhadap kolonisasi molekuler, dan menciptakan narasi baru tentang menjadi multispesies dan mutagenesis kolektif kita.

3 ~ Tantang wacana cisheteronormative dominan, queerphobic seputar bahan kimia pengganggu endokrin (EDC). Mengutip beasiswa Malin Ah-King dan Eva Hayward tentang masalah ini, "Banyak outlet berita melaporkan kisah endokrin yang menakutkan ini dari halaman belakang kita. Dalam upaya untuk mengedepankan masalah ini - seperti yang akan kami jelaskan di media berikut ini telah menyoroti metamorfosis Frankenstein yang mengancam seks dan seksualitas. Alih-alih mengatasi banyak risiko kesehatan lain yang terkait dengan paparan racun, masalah paling sensasional dan polemik muncul untuk diperdebatkan dan ditanggapi kritis. Ini menimbulkan pertanyaan: Mengapa seks lebih penting daripada kanker, penyakit autoimun, dan bahkan kematian? Saraf budaya apa (banyak di antaranya yang terglobalisasi), yang dipicu? Dan, bagi kita yang memiliki keprihatinan feminis, bagaimana kita mengarahkan kembali perdebatan dari esensialisme, seksisme, dan heteronormativitas?" (Jenis Kelamin Beracun).

Schizophyllum Commune adalah "jamur pelapuk putih" yang unik karena ditemukan memiliki lebih dari 28.000 jenis kelamin genetik. Adaptasi ini, banyak yang berteori, telah memungkinkan keragaman genetik yang luar biasa dari spesies ini yang ada di setiap benua di seluruh dunia kecuali Antartika. Kami ingin merayakan keragaman seksual yang indah dari organisme ini sebagai salah satu contoh keanehan biologi. Wacana dominan seputar EDC di media, dan bahkan dari aktivis lingkungan sangat berfokus pada narasi tidak ilmiah, bahwa molekul-molekul ini menyebabkan seksualitas atau gender tertentu yang dipatologikan oleh masyarakat kita, dicap non-normatif, dan sering berusaha untuk dihilangkan atau dihindari. Tidak hanya fokus fobia seks dan fobia aneh dari kemarahan publik tentang EDC yang tidak realistis secara ilmiah (pengganggu hormon dan endokrin tidak membuat orang menjadi aneh atau trans) tetapi juga mengabaikan semua efek nyata yang menghancurkan yang dapat kita kaitkan dengan EDC: obesitas, gangguan tiroid, kanker tertentu, di antara risiko kesehatan lainnya.

Langkah 1: Temukan Komunitas Schizophyllum yang Tinggal di Komunitas Anda

Kultur steril tingkat lab dari Schizophyllum Commune dapat dibeli dengan harga sekitar $350 dari bank kultur mikrobiologis seperti ATCC… itulah sebabnya kami memilih untuk membudidayakan jamur liar secara gratis:)

Saya merasa mudah karena saya telah membaca tentang Schizophyllum Commune dan kebetulan melihatnya tumbuh di pohon di depan apartemen saya suatu hari. Jika Anda tidak begitu beruntung untuk secara tidak sengaja menemukan S. Commune di lingkungan Anda, Anda akan ingin pergi ke daerah berhutan untuk mencari jamur "kurung" yang tumbuh di pohon kayu keras yang sakit (pohon yang terlihat seperti tidak tumbuh subur). terlalu baik) atau pohon tumbang. S. Commune adalah salah satu jamur paling umum yang ada di seluruh dunia dan pada dasarnya dapat ditemukan di mana saja ada kayu keras untuk tumbuh.

Mushroomobserver.org memberikan deskripsi terperinci yang bagus tentang di mana dan kapan Anda mungkin menemukan S. Commune, serta bagaimana mengidentifikasinya dan bagaimana menghindari "kesamaan" yang dapat menyebabkan kesalahan identifikasi:

IDENTIFIKASI: Komune Schizophyllum mudah diidentifikasi dengan insangnya yang terbelah, rambut lebat, dan topi berbentuk kipas. Tutupnya lebarnya 1-4,5cm dan biasanya berbentuk cangkang atau kipas dengan permukaan abu-abu hingga keputihan. Basidiospora berukuran 5-7,5 × 2 -3 mikrometer Jamur serupa yang dikenal sebagai "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa tidak tersebar luas.

HABITAT: Komune Schizophyllum tumbuh di kayu keras menggunakan enzim untuk mendegradasi lignin dan menyebabkan “busuk putih.” Jadi ditemukan di sebagian besar daerah berkayu. Ini dapat ditemukan sepanjang tahun karena kemampuannya untuk mengering, rehidrasi dalam kondisi yang lebih baik, dan kemudian terus bersporulasi.

Jamur ini dapat menjadi parasit pada pohon berdiameter kecil yang berada di bawah tekanan dari faktor lain, seperti kekeringan.

TERLIHAT SAMA: Plicaturopsis crispa atau "Crimped Gill" mirip dengan Split Gill. Ia juga memiliki tubuh buah berbentuk cangkang/kipas. Namun tutupnya berwarna coklat kemerahan atau coklat kuning, dan bagian bawahnya sangat khas. Ini memiliki vena berkerut seperti insang yang jauh berbeda dari insang split komune Schizophyllum. Crimped Gill kurang umum tetapi khas ketika ditemukan."

Langkah 2: Buat Pelat Agar Nutrisi untuk S. Commune untuk Tumbuh

Untuk mengisolasi budaya S. Commune, Anda akan membutuhkan beberapa cawan petri berisi makanan untuk jamur. Ekstrak malt Agar adalah makanan sederhana untuk membuat S. Commune, atau "media nutrisi" yang dapat dibuat dengan bahan-bahan yang mudah didapat. Ini juga merupakan sumber makanan yang baik untuk digunakan saat melakukan percobaan uji enzimatik dengan S. Commune dan jamur busuk putih atau coklat lainnya ~~ proses ini akan dibahas dalam instruksi lain.

CATATAN SAMPING: Jika Anda kesulitan menemukan S. Commune, ada banyak jamur lain dalam famili yang sama yang dapat dibiakkan menggunakan proses yang sama dan sama baiknya jika tidak lebih baik dalam mendegradasi polutan pengganggu endokrin. Ekor Turki (Trametes Versicolor) telah ditemukan dalam banyak penelitian yang melihat ratusan jamur pelapuk putih dan coklat sebagai penghasil enzim "lignoselulosa" tertinggi yang mendegradasi polusi petrokimia. Jamur tiram juga sangat baik dalam hal ini.

Saya melakukan pekerjaan mikrobiologi saya di laboratorium biologi komunitas yang disebut BUGSS (Baltimore Underground Science Space) di mana saya memiliki akses ke peralatan gelas, timbangan digital, silinder bertingkat, autoklaf (untuk sterilisasi panas dan tekanan media), dll. Lab seperti ini memiliki bermunculan di seluruh dunia dalam dekade terakhir, jadi Anda mungkin ingin memeriksa daftar ini untuk melihat apakah ada satu di dekat Anda. Jika Anda tidak memiliki lab komunitas yang bagus seperti ini di daerah Anda, Anda harus berinvestasi dalam beberapa peralatan dasar untuk proses ini seperti:

1 ~ Timbangan digital untuk mengukur bahan Anda dengan tepat

2 ~ Sebuah pressure cooker untuk mensterilkan media Anda dengan panas dan uap

3 ~ Cawan petri, dapat dibeli secara online cukup murah, gelas yang dapat digunakan kembali atau plastik sekali pakai akan berfungsi tetapi dapat digunakan kembali selalu lebih baik:)

4 ~ Beberapa peralatan gelas untuk mencampur bahan, mensterilkan, dan menyimpannya.

Jika Anda tidak ingin berinvestasi dalam peralatan itu, Anda dapat menemukan pelat agar ekstrak malt pra-tuang untuk dibeli di situs web seperti Amazon ~ itu hanya akan lebih mahal dalam jangka panjang jika Anda berencana untuk terus melakukan pekerjaan mikrobiologis.

Sudah banyak panduan bagus dan video youtube tentang cara membuat cawan petri media nutrisi sendiri di rumah. Jadi daripada membahasnya secara mendetail, saya hanya akan menautkan ke beberapa -- dan memberikan resep untuk 2% Malt Extract Agar, yang merupakan media nutrisi yang akan Anda gunakan.

Jamur Freshcap: Panduan Cara Membuat Piring Agar Untuk Menumbuhkan Jamur di Rumah

Mykoweb: Memulai Budidaya Jamur

Lembar Data Teknis Agar Ekstrak Malt

2% Malt Extract Agar (MEA) ~~ Resep untuk 1 Liter:

20g Ekstrak Malt (persediaan pembuatan bir umum, dapat dibeli secara online)

15g Agar (bahan pengeras - ini sering digunakan untuk memasak sehingga dapat dibeli secara online atau di beberapa toko kelontong)

1 Liter H20 (Saya biasanya menggunakan air Reverse Osmosis yang bisa dibeli di sebagian besar toko kelontong di galon kendi)

Resep ini dapat dengan mudah dimodifikasi jika Anda ingin membuat jumlah yang lebih kecil. Saya sering membuat hanya 250 mL dalam satu waktu misalnya, jadi saya hanya menggunakan 5 gram Ekstrak Malt, 3,75 gram Agar, dan 250 mL air.

Langkah 3: Inokulasi Cawan Petri Anda Dengan Jamur

Jamur yang Anda lihat disebut "tubuh buah" itu hanya sebagian kecil dari organisme. Sebagian besar tubuhnya tersembunyi di pohon (atau di tanah), memakan kayu. Bagian jamur ini disebut miselium. Untuk membudidayakan tubuh miselia Schizophyllum Commune yang putih berserabut, tentakular, rhizomatik, ke dalam cawan petri, Anda akan mengambil sampel batang, mensterilkan, dan meletakkannya di piring MEA Anda. Miselium akan tumbuh dari sampel inti batang jamur yang disterilkan dan menjajah cawan petri, tampak seperti tikar katun putih.

Kamu akan membutuhkan:

• Pelat Malt Extract Agar (MEA) yang Anda siapkan di langkah sebelumnya
• 70% Isopropil alkohol (alkohol gosok) dan botol semprot
• Kertas tisu
• Pisau bedah, atau hanya pisau cukur stainless steel -- pemotong kotak bisa digunakan
• pinset logam
• sarung tangan
• Nyala api -- Saya menggunakan lampu alkohol untuk mensterilkan instrumen, NonDisjunction memiliki tutorial yang bagus tentang cara membuatnya di sini.
• Permukaan steril untuk dipotong (saya hanya menggunakan cawan petri steril untuk ini)
• Parafilm, film parafin yang digunakan untuk menyegel cawan petri -- Anda juga bisa menggunakan selotip jika tidak memilikinya

TEKNIK STERIL:

Hal utama yang ingin Anda ingat ketika mencoba menggunakan teknik steril adalah bakteri dan spora terus berjatuhan di udara, jadi Anda ingin menjaga cawan petri Anda tertutup sebanyak mungkin. Saat Anda mengangkat tutupnya untuk menuangkan media, atau menyuntik, selalu yang terbaik adalah memegang tutupnya tepat di atas cawan, memungkinkan Anda untuk mengakses bagian dalam secara horizontal, tetapi menjaga tutupnya di atas cawan untuk mencegah bakteri masuk. Kedua, Anda adalah konglomerat raksasa manusia, bakteri, jamur, dan organisme lain ~~ meskipun Anda tidak dapat melihatnya, Anda dikelilingi oleh awan mikroba padat yang menyebar dari tubuh Anda. Daripada hanya duduk di permukaan kulit Anda, mikrobioma Anda meluas ke udara ~~ sooooooo, jangan pernah melambaikan tangan Anda di atas cawan petri, atau membungkuk di atas cawan terbuka untuk melihat ke dalam. Dan kenakan sarung tangan jika kamu memilikinya;)

SET UP RUANG KERJA SEMI-STERILE ANDA

Pilih permukaan kerja yang tidak berpori yang bersih dari puing-puing dan sampah. Semprotkan area tersebut dengan larutan Isopropil Alkohol 70% dan bersihkan dengan handuk kertas. Tempatkan api Anda di tengah area kerja Anda dan nyalakan. Anda akan ingin bekerja sedekat mungkin dengan nyala api karena menciptakan bidang steril kecil di sekitarnya. Tempatkan pelat MEA Anda di satu sisi dan sampel jamur Anda ke permukaan pemotongan steril di sisi lain. Saya biasanya menggunakan cawan petri steril sebagai permukaan pemotongan steril saya serta tempat istirahat alat. Tuangkan sedikit Isopropil Alkohol ke dalam gelas kecil -- Anda akan menggunakannya untuk mensterilkan pisau dan pinset saat bekerja.

*¡~ INOKULASI ~!*

Sebelum melakukan apa pun, sterilkan pisau dan pinset Anda dengan mencelupkannya ke dalam alch isopropil, lalu tahan sebentar di atas api. Setelah sterilisasi, letakkan di atas permukaan pemotongan steril jika Anda meletakkannya. Dengan menggunakan pinset, pegang batang jamur dan potong sedikit di ujungnya. Ambil potongan ini dan potong semua sisinya sehingga Anda mendapatkan kubus kecil inti batang jamur dengan semua permukaan luar dihilangkan. Ini membantu menyingkirkan semua mikroba lain yang hidup di jamur sehingga mereka tidak mencemari budaya Anda. Kemudian celupkan inti batang ke dalam isopropil selama sekitar 30 detik, tarik keluar, dan biarkan kering di dalam bidang api yang steril (jangan gunakan api untuk mengeringkannya, ini akan membunuh jamur). Api mensterilkan pinset Anda lagi sementara Anda menunggu inti batang kering. Kemudian cukup angkat tutup salah satu pelat MEA Anda cukup untuk memasukkan pinset dari samping, dan gunakan pinset yang disterilkan untuk menempatkan inti batang di tengah piring. Segel piring dengan parafilm, dan selama beberapa minggu berikutnya, Anda akan melihat miselium S. Commune menjajah piring.

Saya biasanya membuat beberapa piring ketika bekerja dengan sampel liar sehingga jika saya mendapatkan kontaminasi, saya lebih mungkin untuk memiliki setidaknya satu budaya bersih.